●备课资料
尼伦伯格的后续实验
(1)按比例加入2种核苷混合的多聚物
由于当时还未分离RNApol酶,无法按设计的模板来合成RNA,但除了UUU,CCC,AAA,GGG以外,还必须破译其他的密码,Nirenberg又想出了一种新的方法,就是按一定的碱基比例来合成RNA。比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP,碱基比为U∶G=5∶1,它们能组成的三联体不外乎8种:UUU,UUG,UGU,GUU,GGG,GGU,GUG,UGG。U和G将随机地加入到三联体中,这样按比例各个位子上进入U和G的概率不同,如UUU∶UGG=(5×5×5)∶(5×1×1)=25∶1;同理UUU∶UUG=5∶1,根据这样的推测,在无细胞系统中以这种比例合成的mRNA产生的氨基酸的比例也应是相应的,这样可以推测出密码子的组成。如氨基酸测定结果:
苯丙氨酸(UUU)∶半胱氨酸(UGU)=5∶1
苯丙氨酸(UUU)∶缬氨酸(GUU)=5∶5
苯丙氨酸(UUU)∶甘氨酸(GUU)=24∶1
苯丙氨酸的密码子是已知的,由3个U组成,那么半胱氨酸一定是由2个U,1个G组成;缬氨酸同样如此;甘氨酸应是由一个U两个G组成。S.Ochoa及其合作者获悉Nirenberg用polyU大获成功之后,利用身边保存着多种多聚核苷酸也开展了破译密码的研究,采用的方法也是加入不同比例的混合多核苷酸两组展开了激烈的竞争,经过两个组一年多的努力,结果搞清了各种氨基酸的碱基组成,但是并不知其顺序。Nirenberg于1964年又采用三联体结合实验,一举破译了所有密码,取得了重大的突破。
(2)三联体结合实验