【基础知识大盘点】
1.基因工程的概念：
⑴基因工程是在 DNA分子水平 上进行设计和施工的，又叫做 DNA重组技术 。
⑵原理（实质）： 基因重组 。
⑶特点：①目的性强（可以 定向 改造某些生物性状）；
②实现不同物种间的基因重组（打破生殖隔离/克服远缘杂交不亲和障碍）。
2.基因工程（DNA重组技术）的工具：限制酶 、DNA连接酶 、载体（最常用：质粒）。
基因工程（DNA重组技术）的工具酶：限制酶 、DNA连接酶 。
3. 限制性核酸内切酶（限制酶） ——“分子手术刀”：准确切割DNA 。
⑴来源（分布）：主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。
⑵功能（作用）：能够识别 双链DNA分子 的 某种特定核苷酸序列 ，并且使每一条链中 特定部位 的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有 专一性（特异性） 。
⑶结果：DNA分子经限制性核酸内切酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——
黏性末端 和 平末端 。
4. DNA连接酶 ——“分子缝合针”：将DNA片段连接起来。不具有专一性（特异性）。
⑴作用：将 双链DNA片段 “缝合”起来，恢复被 限制酶 切开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 。
⑵两种DNA连接酶（E·coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶）的比较：
①相同点：都缝合 磷酸二酯键 。
②区别：E·coli DNA连接酶来源于 大肠杆菌 ，只能将双链DNA片段 互补的黏性末端 之间的磷酸二酯键连接起来；
T4 DNA连接酶来源于 T4噬菌体 ，能缝合双链DNA片段的 两种末端（ 互补的黏性末端和平末端 ），但连接平末端的之间的效率较 低 。
⑶与DNA聚合酶作用的异同:
DNA聚合酶是将 单个脱氧核苷酸 加到已有的核苷酸片段的末端，形成 磷酸二酯键 ，催化 DNA复制 过程， 需要 模板。
DNA连接酶是连接 两个双链DNA片段 的末端，形成 磷酸二酯键 ， 不需要 模板。
