1.分离不同种类蛋白质的原理
蛋白质的理化性质(如形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、对其他分子的亲和力等)千差万别,由此可提取和分离各种蛋白质。
2.凝胶色谱法(分配色谱法)
(1)凝胶:实际上是一些微小的多孔球体,大多数是由多糖类化合物构成的,如葡聚糖、琼脂糖。
(2)原理:凝胶小球体内部有许多贯穿的通道,相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部,只能分布在颗粒之间,通过的路程较短,移动速度较快;相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内部的通道,通过的路程较长,移动速度较慢,因此可将各种相对分子质量不同的蛋白质分离。
(3)分离过程:蛋白质混合物上柱→洗脱→大分子蛋白质移动快、小分子蛋白质移动慢→收集大分子蛋白质→收集小分子蛋白质
说明:洗脱是从色谱柱上端不断注入缓冲液,促进蛋白质分子的差速流动。
3.凝胶电泳法