1.(2018浙江名校协作体9月试题)回答与胚胎工程和基因工程有关的问题。
(1)将人的胰岛素基因导入牛受精卵中,常用 方法获得目的基因,再用 法导入受体细胞。若受体细胞是牛的乳腺细胞,获得重组细胞后,利用 技术才能获得转基因牛。
(2)将成功导入重组DNA分子的多个受精卵进行 至早期囊胚,再分别移入 的母牛的输卵管或子宫角继续发育。
(3)若供体牛一次排卵较少,可用激素处理促其 ;若筛选过程中只有极少数受精卵导入成功,可在 时期进行胚胎分割以获得多个胚胎。
答案(1)化学(人工)合成(或PCR扩增) 显微注射 核移植(克隆)
(2)胚胎体外培养 同期发情
(3)超数排卵 卵裂球(早期囊胚)
解析(1)人的胰岛素基因序列是已知的,通常用人工合成的方法获得目的基因,再用显微注射法导入受体细胞,形成重组细胞。形成重组细胞后要利用核移植技术才能获得转基因牛。
(2)通常移植的最适宜时期是发育到8细胞以上的胚胎,如早期囊胚,再移入同期发情母牛子宫中继续发育。
(3)要获得更多的卵细胞,可通过激素处理促进母牛超数排卵。胚胎分割的需要对卵裂球(或早期囊胚)进行分割。
2.(2018浙江金丽衢十二校高三8月第一次联考)下图为绿色荧光小鼠制备流程图,Gfp是绿色荧光蛋白基因,请分析回答下列问题。
(1)为构建表达载体,通常用相同的限制性核酸内切酶切割Gfp基因和Neo所在的载体,保证两者产生相同的粘性末端,但弊端是Gfp基因和Neo所在的载体在连接时可能会发生 ,表达载体与染色体DNA整合后能使Gfp基因的遗传特性得以维持稳定和表达,从而完成 过程。
(2)图中载体上的Neo基因是一种抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是一种抗生素(对细胞有毒害作用),添加G418的目的是 。
(3)图中为促进胚胎干细胞增殖,培养过程中需加入 抑制分化。
(4)图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的 部分,图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠b进行 处理。
(5)可以使用 法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。
答案(1)自身环化 转化 (2)鉴定和筛选出导入目的基因的胚胎干细胞 (3)胚胎成纤维细胞(饲养层) (4)内细胞团 同期发情 (5)抗原—抗体杂交
解析(1)用同一种限制性核酸内切酶切割载体和目的基因,容易形成自身环化,故需要进行筛选。把重组分子导入特定的宿主细胞的过程叫转化。(2)抗生素抗性基因用于鉴定和筛选导入目的基因的胚胎干细胞。(3)用于饲养层的细胞一般是胚胎成纤维细胞,因为胚胎成纤维细胞可以分泌一些能抑制细胞分化的物质,满足促进干细胞生长的同时抑制干细胞分化的条件。(4)胚胎干细胞通过显微注射注入内细胞团,移植时要对代孕母鼠b进行同期发情处理。(5)目的基因有没有表达可通过抗原—抗体杂交进行检测。
